豹斑毒鹅膏菌和褐鳞环柄菇的毒素粗品对剑水蚤的毒效研究

摘要：利用豹斑毒鹅膏菌（Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．）和褐鳞环柄菇（Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．）的毒素粗品对剑水蚤（Ｃｙｃｌｏｐｓ）进行毒杀试验。结果表明，豹斑毒鹅膏菌和褐鳞环柄菇的毒素粗品对剑水蚤均具有一定的毒杀作用，并表现出明显的剂量效应和时间效应。在作用时间为12 h时，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的半致死浓度（ＬＣ５０）要低于褐鳞环柄菇毒素粗品；在作用时间为４８ ｈ时，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的ＬＣ５０为０．０４９ ｍｇ／ｍＬ，褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤的ＬＣ５０为０．０３８ ｍｇ／ｍＬ；在相同浓度下，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的半致死时间（ＬＴ５０）比褐鳞环柄菇毒素粗品的都要短。因此，在剑水蚤大量暴发的情况下，可选择豹斑毒鹅膏菌毒素粗品来治理；推测褐鳞环柄菇的毒性发作有一定的潜伏期，若需要较长时间的持续毒杀作用时，则可用褐鳞环柄菇毒素粗品来治理。

关键词：剑水蚤（Ｃｙｃｌｏｐｓ）；豹斑毒鹅膏菌（Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．）；褐鳞环柄菇（Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．）；毒素粗品；毒效试验

中图分类号：Ｑ９５９．２２３＋．３４；Ｓ４８２．３＋９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）17－3801-03

Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ． ａｎｄ Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ． Ｔｏｘｉｎｓ Ｃｒｕｄｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｙｃｌｏｐｓ

ＬＡＩ Ｊｉａｎ，ＹＡＮＧ Ｓｈａｏ－ｂｉｎ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１００４４， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｆ Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ（ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ． ａｎｄ Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ． ｔｏｘｉｎｓ ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｙｃｌｏｐｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｂｏｔｈ ｔｈｅ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ａｎｄ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎｓ ｈａd ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ， ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｏｓｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ ｅｆｆｅｃｔ． Ｉｎ 12 ｈ， ＬＣ５０ ｏｆ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ｔｏｘｉｎ are lower than the Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ． ｔｏｘｉｎ； Ｉｎ ４８ ｈ， ＬＣ５０ ｏｆ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ｔｏｘｉｎ was ０．０４９ ｍｇ／ｍＬ， ａｎｄ ｔｈｅ ＬＣ５０ ｏｆ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎ waｓ ０．０３８ ｍｇ／ｍＬ； Ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ＬＴ５０ ｏｆ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ｔｏｘｉｎ was shorter ｔｈａｎ ｔｈｅ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｆｏｒ ｔｈｅ ｌａｒｇｅ ｏｕｔｂｒｅａｋｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｃｌｏｐｓ， ｏｎｅ ｃａｎ ｃｈｏｏｓｅ ｔｈｅ Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ． ｔｏｘｉｎ； dicating that there is a latent period for the toxicity of L. helveola， ｆｏｒ ｌｏｎｇｅｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔ， ｏｎｅ ｃｈｏｏｓｅ ｔｈｅ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｙｃｌｏｐｓ； Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．； Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．； ｔｏｘｉｎｓ ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ； ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ

剑水蚤（Ｃｙｃｌｏｐｓ）隶属节肢动物门甲壳纲剑水蚤目剑水蚤科剑水蚤属，是淡水浮游动物中的重要类群。水蚤是鱼类的天然饵料，但是由于人类过量捕捉经济鱼类，打破了原有的水生生态平衡，导致包括水蚤类在内的各类浮游动物大量孳生，严重影响了水产养殖业的经济效益。近年来，以剑水蚤为代表的水蚤类浮游动物已在许多城市水源特别是水库、湖泊类水源水中大量出现。剑水蚤的甲壳具有很强的抗氧化性，常规水处理的消毒工艺难以将其杀灭；剑水蚤是诸如血吸虫、线虫等水中致病生物的中间宿主，从而成为疾病传播的重要媒介，对居民饮用水的卫生安全构成了潜在威胁。

目前，对剑水蚤的杀灭处理主要是使用有机磷化学药剂，但磷不易降解，其药物残留会对水域和土壤造成污染，对人畜健康不利。因此，开发绿色环保型生态药剂势在必行。近几年来，一些高等大型真菌已经逐渐被证实含有杀虫活性物质［１］。豹斑毒鹅膏菌（Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．）及褐鳞环柄菇（Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．）具有一定的生物毒杀活性，且其活性比较稳定，不易受温度和酸碱性的影响［２，３］。因此，本试验在室内测定了豹斑毒鹅膏菌和褐鳞环柄菇的毒素粗品对剑水蚤的毒效，以期为剑水蚤等浮游生物的污染治理及大型有毒真菌的开发利用提供一定的参考。

１ 材料与方法

１．１ 材料

１．１．１ 供试真菌 豹斑毒鹅膏菌和褐鳞环柄菇先后于２０１１年７～９月采集于辽宁省沈阳市辉山风景区，参照相关资料［２］进行对比，并经辽宁省农业科学院食用菌研究所刘俊杰研究员鉴定。

１．１．２ 供试虫体 剑水蚤从野外采集，经标准方法［４］培养繁殖后选择剑水蚤成虫作为试验对象。

１．１．３ 毒素粗品制备 将采集的两种大型真菌的子实体分别进行固体菌种扩繁，接种于装有标准的ＰDA液体培养基的摇瓶中，经液体发酵摇床培养后对发酵液进行超声波细胞破碎，破碎液于９ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心后取上清液进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液于鼓风干燥箱中４０ ℃恒温干燥得毒素粗品固体物质，装入ＥＰ管中备用［５－７］。

１．１．４ 仪器与设备 ＴＤ电子天平，ＶＰＬ－Ａ５０３２智能压力蒸汽灭菌器，ＨＺＱ－Ｆ１６０全温振荡培养箱，ＺＨＪＨ－２１０９Ｂ超净工作台，ＪＹ９９－２Ｄ超声波细胞粉碎机，ＧＬ－１６１Ｘ箱式高速冷冻离心机，１０１－Ｉ电热恒温鼓风干燥箱等。

１．２ 方法

通过预试验确定合适的浓度梯度［８］，将豹斑毒鹅膏菌的毒素粗品用０．５ ｍＬ ９５％的乙醇溶解，然后用曝气自来水分别按Ａ１（０．２５ ｍｇ／ｍＬ）、Ａ２（０．６７ ｍｇ／ｍＬ）、Ａ３（０．８0 ｍｇ／ｍＬ）、Ａ４（１．０0 ｍｇ／ｍＬ）、Ａ５（１．３0 ｍｇ／ｍＬ）、Ａ６（２．０0 ｍｇ／ｍＬ）的浓度各配制１００ ｍＬ溶液，以仅含有０．５ ｍＬ ９５％乙醇的曝气自来水溶液Ａ０（０ ｍｇ／ｍＬ）为空白对照。溶液均为自然ｐＨ。将配制好的溶液分别注入７个１５０ ｍＬ烧杯中，每个烧杯中分别用１ ｍＬ注射器接种３０只剑水蚤，再将烧杯放入生化培养箱中，保持（２２±１） ℃、通风、光暗比为１２ ｈ∶１２ ｈ的条件。每组试验重复３次。按上述相同的方法和试验条件进行褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤的毒效试验，分别设置Ｂ１（０．２５ ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ２（０．６７ ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ３（０．８0 ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ４（１．０0 ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ５（１．３0 ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ６（２．０0 ｍｇ／ｍＬ）共６个系列梯度和空白对照Ｂ０（０ ｍｇ／ｍＬ）。分别于试验后的１２、２４、４８ ｈ观察剑水蚤的死亡情况，记录死亡数，按以下公式计算剑水蚤的死亡率。

死亡率＝■×１００％

剑水蚤的死亡标准：设定剑水蚤呼吸和心跳停止为死亡，通过立体显微镜观察剑水蚤的死亡情况。

１．３ 数据处理

运用ＳＰＳＳ １７．０统计软件对数据进行处理，采用概率单位法求出回归方程，根据回归方程分别计算出豹斑毒鹅膏菌毒素粗品和褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤的半致死浓度（ＬＣ５０）及半致死时间（ＬＴ５０）。

２ 结果与分析

２．１ 剑水蚤的中毒现象

正常生活未中毒的剑水蚤上下游动富有节奏感，跳跃时具有直线跳跃的趋性，且具有一定的频率。在行为上，未中毒的剑水蚤跳跃频繁，反应敏捷；用强光照射烧杯时，剑水蚤具有强烈的趋光性，跳跃频率急剧加快；当用玻璃棒轻轻敲击烧杯时，剑水蚤应激反应迅速且强烈。剑水蚤通常在水体的中上部活动。

与正常生活未中毒的剑水蚤相比，已中毒的剑水蚤上下游动没有节奏感，跳跃时上时下、时前时后，如醉酒状；而且在行为上也有明显变化：已中毒的剑水蚤跳跃频率大大减慢，反应迟缓；用强光照射烧杯时其无明显的趋光性；当用玻璃棒轻轻敲击烧杯时，其稍有应激反应，缓慢跳跃后逐渐下沉至水体中下部；已中毒的剑水蚤通常在水体的中下部活动。

２．２ 毒效试验分析

１２、２４、４８ ｈ内不同浓度的豹斑毒鹅膏菌毒素粗品及褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤的毒杀效率分别如表１和表２所示。由表１可以看出，在相同的作用时间下，随着豹斑毒鹅膏菌毒素粗品浓度的升高，毒杀效率明显提高，具有明显的剂量效应；在相同的浓度下，随着作用时间的增加，毒杀效率明显提高，具有明显的时间效应。在４８ ｈ的作用时间下，浓度为０．２５ ｍｇ／ｍＬ时豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的毒杀效率达到了８４．３３％；浓度为２．０0 ｍｇ／ｍＬ时毒杀效率达到了１００．００％。

由表２可以看出，在相同的作用时间下，随着褐鳞环柄菇毒素粗品浓度的升高，毒杀效率明显提高，具有明显的剂量效应；在相同的浓度下，随着作用时间的增加毒杀效率明显提高，具有明显的时间效应。在４８ ｈ的作用时间下，浓度为０．２５ ｍｇ／ｍＬ时毒杀效率达到了９１．１１％，浓度在1．30 ｍｇ／ｍＬ时毒杀效率达到了１００．００％。

１２、２４、４８ ｈ豹斑毒鹅膏菌及褐鳞环柄菇的毒素粗品对剑水蚤毒杀效率的回归方程及ＬＣ５０如表３所示。由表３可知，１２、２４、４８ ｈ豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的ＬＣ５０分别为０．４２１、０．２９０、０．０４９ ｍｇ／ｍＬ，褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤的ＬＣ５０分别为０．７６４、０．２６２、 ０．０３８ ｍｇ／ｍＬ。作用时间为１２ ｈ时，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的ＬＣ５０较褐鳞环柄菇毒素粗品低，说明在１２ ｈ的作用时间下，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的毒杀效率比褐鳞环柄菇毒素粗品高。在作用时间为２４ ｈ和４８ ｈ时，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的ＬＣ５０均比褐鳞环柄菇毒素粗品的高，说明在２４ ｈ和４８ ｈ的作用时间下，褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤的毒杀效率较豹斑毒鹅膏菌毒素粗品高。由此推测，褐鳞环柄菇的毒性发作会有一定的潜伏期，其相对豹斑毒鹅膏菌是慢毒。

不同浓度的豹斑毒鹅膏菌毒素粗品及褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤毒杀效率的回归方程及LT５０如表４所示。由表４可知，在相同浓度下，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的LT５０比褐鳞环柄菇毒素粗品的都要短。表明在相同浓度下，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的毒杀效率比褐鳞环柄菇毒素粗品高。

３ 小结

本研究表明，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品和褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤具有一定的毒杀作用，并表现出明显的剂量效应和时间效应。在较短的作用时间（１２ ｈ）下，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的毒杀效率高于褐鳞环柄菇毒素粗品；在相同浓度下，豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的ＬＴ５０比褐鳞环柄菇毒素粗品的都要短。因此，若在剑水蚤大暴发的情况下，可首选豹斑毒鹅膏菌毒素粗品来治理；推测褐鳞环柄菇的毒性发作有一定的潜伏期，若需要较长时间的持续毒杀作用，则可用褐鳞环柄菇毒素粗品来治理。

考虑到剑水蚤对水产养殖业及城市饮用水安全存在一定的危害，寻找更加安全、环保的高效生物源杀虫剂来防治剑水蚤还需要进一步的研究。

参考文献：

［１］ 杜秀菊，杜秀云． 毒蕈毒素及其应用［Ｊ］．安徽农业科学，２０１０， ３８（１３）：７１７２-７１７４．

［２］ 卯晓岚． 中国大型真菌［Ｍ］． 郑州：河南科学技术出版社，２０００．

［３］ 王启兴，罗大蓉，杨志宏，等． 一起误食毒蕈豹斑毒伞引起的食物中毒［Ｊ］． 职业卫生与病伤，２００８，２３（１）：４３．

［４］ 潘力军，高世荣，孙凤英，等． 应用大型水蚤和斑马鱼对几种工业废水和生活污水的毒性监测［Ｊ］． 环境科学与管理，２００７，３２（２）：１８０－１８３．

［５］ 张建辉，赵经周，郝再彬． 食药用菌的液体培养［Ｊ］． 林业科技，２００２，２７（４）：６１－６３．

［６］ 李正鹏，林 毅，蔡永萍，等． 白灵菇液体发酵工艺［Ｊ］． 生物学杂志，２００６，２３（１）：２８－３０．

［７］ 毛 宁，丁珊珊，余宗钟． 裸盖菇Ｌ－００１菌株液体培养及其产毒素初探［Ｊ］． 福建师范大学学报（自然科学版），２００９，２５（６）：７７－８１．

［８］ 吴玉东，鲁冬林，陆 慧，等． 非洲山毛豆水提物对水产养殖池塘相关物种：轮虫、剑水蚤、库蚊幼虫和蓝彩鳉鱼的急性毒性试验［Ｊ］． 世界农药，２０１０，３２（２）：４１－４３．

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