产气荚膜梭菌肠毒素分离和鉴定方法

时间：2021-08-05　来源：博通范文网本文已影响人

产气荚膜梭菌肠毒素的分离和鉴定方法

1 毒素检查

羊只死亡后，尽快取小肠内容物（最好是回肠内容物），加1%的氯仿防腐，在冷藏条件下送检。实验室在收到送检材料后，用生理盐水稀释2~4倍（若内容物稀薄，不必稀释），充分混合后经离心沉淀（3000 r/min）15 min，取上清液，用赛氏滤器过滤后，1份直接注射动物（两只），另1份加1%的胰蛋白酶粉，在室温处理1 h以致活ε和1毒素，破坏β毒素，然后注射另一组动物（两只）。若无离心机和赛氏滤器，可用滤纸反复过滤，直到滤液清朗即可。动物可用小鼠（静脉注射0.2 mL~0.4mL）或家兔（静脉注射2mL~4mL）。注射后至少观察24h，根据两组动物的反应情况作出判断。如肠毒素含量低，动物也可能于注射后一定时间内呈现轻度昏迷，呼吸加快，经1h左右可能恢复。.正常绵羊肠内容物注射后不引起反应。

也可用豚鼠进行毒素检查。方法为皮内注射上述检滤液0.2 mL~0.4 mL，观察48 h，如果有毒素存在，注射部可见坏死变化。

2 中和试验

2.1

取灭菌试管5支，编为1、2、3、4、5号，然后按表1所列，分别加入含毒素滤液、抗毒素和生理盐水，每管总量为1.2 mL。混合后将5个管同时放置37C温箱中，中和40 min。

表1

中和试验方法加样表管号肠内容物滤液（mL）

抗毒素（mL）

生理盐水（mL）

中和静脉注射小鼠 B 型 C 型 D 型 E 型数量（只）

剂量（mL/只）

1 0.9 0.3 - - - - 37℃，40min 2 0.4 2 0.9 - 0.3 - - - 2 0.4 3 0.9 - - 0.3 - - 2 0.4 4 0.9 - - - 0.3 - 2 0.4 5 0.9 - - - - 0.3 2 0.4 2.1.1 小鼠10只，分为5组，每组2只，各组依次静脉注射上述5个管中一个管中的混合液，注射剂量为每鼠0.4 mL，观察72 h，按表2判断结果。

表2

试验结果判定

第一种结果第二种结果第三种结果第四种结果第五种结果第六种结果

B型血清+肠内容物滤液

活

肠毒素是 A 型

活

肠毒素是 B 型活

肠毒素是 C 型活

肠毒素是 D 型死

肠毒素是 E 型死

1.不是魏氏梭菌毒素，考虑其它毒素或毒物